荧光抗体的制备

（一）免疫球蛋白的提取（二）荧光素1．荧光色素的基本条件（1）具有化学活性基团，如异硫氰基（-NCS）等，易与免疫球蛋白结合形成共价键。（2）对免疫球蛋白无毒性，不影响抗体活性。（3）荧光效应高，与蛋白结合需要量少。（4）荧光素性能稳定，结合物性能稳定，容易贮藏。（5）结合物的颜色必须与背景组织有良好的反衬作用，易于观察判定。到目前为止，基本符合上述要求的荧光素只有异硫氰酸荧光素（FITC），丽丝胺罗丹明B200（RB200）。2．常用的荧光色素（1）异硫氰酸荧光素：又称异硫氰酸荧光黄，纯品为橙*粉末。分有结晶型与粉末型两种,结晶型荧光强度大、稳定、优于粉末型。分子式C21H11O2N5、分子量389，溶于水，易溶于pH8-9.5碳酸盐缓冲液中。最大吸收波长为495nm。最大发射波长520nm。异硫氰酸荧光黄性质稳定，于低温下可保存二年以上，但久置标记抗体能力弱，荧光亮度差，故应采用新产品。异硫氰酸荧光素借助异硫氰基与蛋白中氨基酸（主要是赖氨酸）的氨基结合。一个IgG分子有86个氨基酸残基，一般最多能标记16～20个荧光素分子。（2）丽丝胺罗丹明：为褐色粉末，不溶于水、易溶于酒精和丙酮。荧光为桔红色。性质稳定，可长期保存。分子式C23H29O7NaS2，分子量为580，最大吸收波长570nm，最大发射波长为600nm。由于丽丝胺罗丹明荧光效能较低，一般不
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