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(一)制片 选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片,洗净后浸泡于无水乙醇和*等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。(二)固定除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外,一般均应固定。固定的作用有三:①防止标本从玻片上脱落;②除去防碍抗原—抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;③固定的标本易于保存,如组织切片固定后在-20℃下可保存一年而不改变其染色特性。标本的固定原则是:①不能损伤细胞内的抗原;②不能凝集蛋白质;③不能损伤细胞形态;④固定后应保持细胞膜的通透性,以允许抗体进入与抗原结合。表 常用抗原物质的固定方法 抗原物质 固定剂 固定条件(min) 蛋白质抗原 < 1 > < 2 >
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