玻璃奶法快速纯化回收DN-段

“基因纯”试剂： 1ml4．超纯水： 1ml使用前，将DNA洗涤浓缩液（10ml）倒入一玻璃瓶中，加140ml无水乙醇及50ml蒸馏水（由使用者自配），混匀后置于-20℃冰箱中，其余溶液置于4℃冰箱。三、操作步骤从琼脂糖凝胶中分离纯化DN-段a. 常规DNA电泳。按常规方法用溴化乙锭（EB）染色DNA，而后将欲分离的DNA带从胶上切割下来，置于一1.5ml离心管中。b. 称出凝胶带的重量，加入三倍量（V/W）的碘化钠溶液。（如0.1g凝胶中加入0.3ml碘化钠溶液）。c. 置于55℃水浴5-10分钟，直至凝胶完全溶化。d. 加入20ul充分混匀的“基因纯”试剂（建议使用前用漩涡振荡器振荡3分钟），室温放置5分钟（期间不时将管子颠倒几次以混匀）。e. 离心10秒（10,000rpm），倒去上清液。f. 加0.8ml刚从冰箱中取出的DNA洗涤液，充分摇匀，离心10秒，去上清。g. 重复步骤f两次（共洗涤三次）。h. 用吸水纸仔细将管壁上及管底残留的洗涤液吸干。i. 加入20ul超纯水，混匀后置于55℃水浴5分钟。j. 离心3分钟，将上清液小心吸至另一个离心管，即为纯化的DNA。可直接用于酶切、亚克隆、PCR、标记、探针制备、序列测定、细胞转染等。注意事项：溴化乙锭染色后的DNA易受紫外光破坏，故尽量放置于暗室，切带时应使用长波长紫外灯，切胶时间尽量短。DNA洗涤液应保持在低温，否则可能使DNA从“基因纯”试剂上脱落而导致回收率降低。步骤h是另一关键，管壁和管底残留的洗涤液若不完全除去，可能导致“基因纯”试剂上结合的DNA无法由蒸馏水洗脱。PCR反应物中纯化目的DN-段 PCR反应完毕后，加蒸馏水至100ul（最后体积）。加入300ul碘化钠溶液，混匀。以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DN-段”中步骤d到j相同。从探针制备反应中除去未标记上的核苷酸及小的DN-段探针制备反应完毕后，加蒸馏水至100ul（最后体积）。加入300ul碘化钠溶液，混匀。以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DN-段”中步骤d到j相同。DNA浓缩，去盐及去除杂质加入3倍量的碘化钠溶液于样品DNA溶液中（若DNA为固态，则先将之溶于适量水或TE中，再加3倍体积的碘化钠溶液）。加20ul或更多的“基因纯”试剂（每ul该试剂可吸附0.3ugDNA，操作者可根据这一指标自行决定“基因纯”试剂的用量，但不应少于10ul）。以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DN-段”中步骤d到j相同。
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