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    免疫组化小贴士

    50 丙酮溶液中浸泡3分钟,晾干,即可进行下一步。 7.灭活内源性酶:HRP系统:3%双氧水灭活;AP系统:3%HAc灭活。 8.暴露抗原:对于石蜡切片的免疫组化实验时,必须采用高温加热抗原修复,这将有助于暴露抗原决定簇,从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书)。对于不同的组织,不同的抗原,不同的抗体,所采用的方法应不一样,可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。胶原还可以用胃蛋白酶消化等。 9.封闭:在山羊血清封闭,非特异性染色仍然较强时,可延长封闭时间或用浓缩血清封闭 10.抗体稀释:应遵循“现用现配”的原则,对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。 11.背景高:在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下,如果背景依旧高,可采用含1‰ Tween20的PBS洗,特别是在显色之前要多洗。 12.返蓝:在苏木素复染后,可用碱性缓冲液(如PBS)或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。 13.显色:一定要在显微镜下观察,注意控制背景。 14.在整个操作过程中,切片千万不能干燥,否则会有非特异性染色。
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