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    细胞免疫化学:免疫酶标技术

    1) 直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前15分钟配制。8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。 2) 间接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.滴加酶标二抗,室温1小时。8.PBS洗涤3×3分钟。9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。 3) PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)1.标定固定后,PBS洗涤。2.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。3.PBS洗涤2×3分钟。4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。5.滴加一抗,室温1小
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