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0柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱 ↓ 收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F／P 比值。第二个荧光素峰为游离荧光素 计算: 2.87×A495 F／P＝──────── A280-0.35×A495 合适的F／P值为2～4。 (三)试剂器材 1.纯化的多克隆抗体或单克隆抗体。 2.FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它荧光色素。 3.PBS、DMSO 4.PH9～9.5碳酸盐缓冲液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸馏水至500ml。 5.PD10柱(Sephadex G25柱) 6.磁力搅拌器，紫外分光光度计等 (四)注意事项 1.FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。 2.FITC-DMSO液要临用时配制。 3.碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
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