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CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,其原理是:采用机械破碎植物细胞,然后加入CTAB分离缓冲液将DNA溶解出来,再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质,最后得到DNA。CTAB法的版本有很多,不过大同小异。以下是我使用的方法:1.将植物组织洗净,用75%的酒精表面消毒4-5min,用去离子水冲洗3次;2. 将样品放在灭过菌的研钵中,加入液氮捣碎,迅速转入1.5ml离心管中,加入600mlCTAB(或同时加入石英砂和CTAB研磨,然 后转入1.5ml离心管中);3. 65℃水浴1h(每20min反转摇匀一次);4. 加等体积的氯仿-异戊醇(体积比24:1),或加入苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒混匀;5. 6500rpm离心30min,取上清于新管中;6. 重复4,5步骤;7. 向上清中加入2倍体积的无水乙醇(或2/3体积的异丙醇)沉淀DNA,-20℃放置20min或更长时间,或过夜;9. 加75%的乙醇清洗DNA,每次12000rpm 2min,去上清;10. 风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA;11. 取2ul溶液电泳检测。 你还没注册?或者没有登录?
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