PCR产物测序

PCR产物测序--利用核酸外切酶 I和热敏磷酸酶去除引物和dNTPs去除引物和dNTPs试试核酸外切酶Ⅰ和热敏磷酸酶！PCR反应完毕后，产物里通常还混有PCR引物和过量的dNTPs--如果产物还要进行测序，那你一定要去除它们！通常我们采用胶回收的方法提纯PCR产物，可是胶回收法不仅成本高，麻烦，而且还意味着一定量的产物损失。现在，你可以利用NEB提供的核酸外切酶 I和热敏磷酸酶简单、方便地去除多余的引物和dNTPs。实验步骤：取出7.5 μl PCR反应混合物；在反应混合物中加入0.5 μl (10 units)的核酸外切酶 I (20,000 units/ml), 37°C反应15分钟; 再加入1μl的10× AP Buffer 和1μl (5 units) 热敏磷酸酶，37°C反应15分钟;如果反应时间延长，可减少酶用量，需试验验证。热失活核酸外切酶 I和热敏磷酸酶:80°C保温20分钟，终止反应。反应物可直接用于测序。
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