耐热DNA聚合酶综述

耐热 DNA聚合酶综述(Thermpholic Polymerases Overview) NEB公司提供多种耐热DNA聚合酶，选用时，请考虑以下几点：应用高保真PCR: 当用于高保真PCR或产物要求是平末端时，请选用VentR、Deep VentR 或9°Nm DNA聚合酶。上述酶具有3→5外切酶的校读功能，能每次从引物3末端切掉一个碱基，故使用时比不具校读功能的聚合酶更需要优化反应条件。常规PCR及测序：当用于常规PCR反应或测序时，建议用Taq DNA聚合酶，或不具有校读功能的VentR（exo-）或Deep VentR（exo-）DNA聚合酶。这些酶对于反应条件要求不高。添加已修饰的核苷酸: 需要添加脱氧核苷酸类似物，如无环核苷酸、双脱氧核苷酸和核糖核苷酸时，建议选用Therminator DNA聚合酶。优化PCR反应条件使用耐热DNA聚合酶进行PCR反应，需考虑以下几个因素：聚合酶用量，退火温度和镁离子浓度。聚合酶用量: 选用最适酶量是反应的关键，特别是对于具有校读功能的DNA聚合酶。建议：在每100μl反应体系中，首先试用0.5－1个单位的具有校读功能的DNA聚合酶，或4个单位的不具有校
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