· 切除DNA, RNA, rNTPs及dNTPs的5′末端磷酸基团· 防止克隆载体的自环化连接· 蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化 · 随酶提供10X Reaction Buffer 下载: 技术简报 产品说明：碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DN-段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。来源：小牛肠粘膜。应用：· 除去核酸3′或5′末端的磷酸基团· 为5′末端标记准备模板 · 防止DN-段的自连接 · 蛋白质的去磷酸化 反应条件： 1X NEBuffer 3[100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)]。 另外，CIP在NEBuffers 2、NEBuffers 4 以及EcoR I和BamH I的反应Buffer中也有活性。CIP去磷酸化步骤：1. 将DNA溶在1X NEBuffer (0.5 μg/10 μl)中。2. 每μg载体DNA加0.5单位的酶。3. 37°C温育60 分钟。4. 通过胶回收、柱离心或酚抽提方法纯化DNA。质量保证： CIP 由New England Biolabs的芬兰分公司 Finnzymes Oy 所纯化，不含核酸外切酶、核酸内切酶或RNA酶，质量控制检测在Finnzymes Oy公司进行，并经New England Biolabs认证。单位定义：在1 ml反应体系中，37°C、1分钟催化1 μmol的对-硝基酚磷酸(pNPP)水解成对硝基酚(pNP)所需的酶量定义为一个活力单位(2)。活性检测条件： 1 M 乙二胺(pH 9.8)，0.5 mM MgCl2，10 mM 对-硝基酚磷酸和适量的酶（这些条件仅用于定量检测酶活力）。浓度： 10,000 units/ml。贮存条件： 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM MgCl2, 0.1 mM ZnCl2 和50%甘油，-20°C 贮存。热失活条件: 无参考文献: 1. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2. Mossner, E., Boll, M. and Pfleiderer, G. (1980) Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem. 361, 543-549.
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