探针制备与非同位素标记新方

一、概述　　近年来核酸杂交技术在分子生物学、临床医学、细胞生物学、分子遗传学等学科领域中应用，得以飞速的发展。基因探针的制备技术及同位素、非同位素标记、检测技术则是基因诊断技术中的关键一环。而从70年代中期以来核酸探针杂交技术就已经在科研和临床中被广泛采用，成为一项直接检查病原体、癌基因和遗传病基因突变的重要手段，而采用的方法主要是用放射性同位素标记的探针来完成。80年代以后人们致力于非同位素标记技术的建立，其中应用最广泛的是生物素标记的核酸探针以及后来发展的以地高辛甙元为标志物，以抗体一酶系统显示的试剂盒。在生物素标记系列中，初期出现的是以Bio-11-dUTP替代TTP在缺口平移中掺入的标记法，随后又改进为随机引物掺入标记法，至1987年澳大利亚推出光敏生物素标记法之后，我们又进一步发展了长臂光敏生物素，使标记方法大为简化，不论双链或单DNA或RNA都可以标记。除临床医学外，应用的领域也越来越广泛。二、核酸探针的制备　　用探针进行基因诊断的关键首先是要取得探针。探针是一段有特定序列的，有一定长度（15个至近千个核苷酸）的核酸片段，也可以是完整基因，亦可以为其一部分；可以是天然序列，亦可以是人工合成序列，但必须加以标记。通过分子杂交来检查标本中的互补序列。　　核酸序列可以是克隆的，也可以是合成的，这主要是取决于核酸探针是否能满足特异性要求。如果有特异、或当DNA序列未知而
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