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930 ml 附：1M Tris-HCl (pH8.0) 配制： 500ml Tris-base 称量 60.5g 加水400ml溶解 加入HCl 42ml 后 继续用HCl调pH至8.0 加ddH2O定容至500ml 0.5M EDTA (pH8.0) 配制： 500mlEDTA钠盐 93.06gNaOH 10g加水400ml溶解用1N NaOH调pH至8.0最后定容至500ml Solution II: 配制： 使用前新鲜配制：miniprep:200ul/管 10M NaOH 4 ul10% SDS 20 ulddH2O 176 ul macroprep:10ml/管 10M NaOH 200 ul10% SDS 1000 ulddH2O 8.8 ml 10M NaOH 配制：500ml (装于塑料瓶中) 称量 NaOH 200 g 10% SDS 配制：500ml 称量 SDS 50 g（加热溶解） Solution III 配制： 1000ml/瓶5M KAc 600 ml冰醋酸 115 mlddH2O 285 ml Solution IV 配制： 200ml/瓶NaCl 称量 18.7gPEG-6000称量 26g 加ddH2O定容至 200ml TE 配制： 500ml/瓶Tris-HCl (1M Tris-HCl pH8.0) 5mlEDTA (0.5M EDTA pH8.0) 1ml加ddH2O定容至 494ml RTE 配制： 50ml/管TE 49.5ml分装好的RNase(10mg/ml) 0.5ml 接种200ul菌种于30ml 的TB中，37℃，300rpm的摇床中培养过夜，将菌倒入50ml的离心管，4℃离心10min，弃上清，加入5ml溶液I，剧烈震荡混匀；加入10ml溶液II，轻轻颠倒混匀，加入7.5ml的溶液III，混匀后4℃，4000rpm离心10min，上清通过两层纱布过滤到一洁净的50ml离心管中，然后加入0.6倍体积的异丙醇，混匀后4℃，4000rpm离心15min；弃上清，沉淀中加入1ml含有0.1mg/ml的RNA酶的TE，放入37℃-55℃水浴30min，加入1ml 溶液IV，混匀后4℃，4000rpm离心15min；弃上清，沉淀加入0.4mlTE，溶解后加入等体积的酚/氯仿，混匀后室温12000rpm离心4min，将上清移入一新的洁净Eppendorf管中，用酚/氯仿重复抽提一次，上清中加入2.5倍体积的无水乙醇，混匀后室温12000rpm离心4min，沉淀用75%乙醇洗涤一遍，溶于0.2-0.4mlTE中，65℃放置10min，测定OD值。4℃冻存备用
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