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1. 什么是western blot?答：WB又称免疫印记法.是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。2. western blot 有什么优点？答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。3. western blot 的具体步骤是什么？答：一. 制样（以提动物组织总蛋白为例），1） 组织洗涤后加入3 倍体积PBS，0℃研磨。2） 加入5×STOP buffer3） 180W, 6mins，0℃超声波破碎4） 5000rpm，5mins 离心，取上清。5） 加入REB(9.5ml加入0.5ml)，溴酚蓝（9.5ml加入0.5ml）6） 煮沸，10min7） 分装，于-20℃保存，用时取出，直接溶解上样。二． 电泳（SDS-PAGE）建议欲检测抗原10－30kd, 用15％胶；30－100kd, 用10％胶；100－200kd，用7.5％胶。1）配胶（one piece）A.分离胶。单位：ml。Total: 8ml 7.5％ 10％ 15%2×Sep. buffer 4 4 430％ Gel.sol 2.0 2.7 4ddH2O 1.9 1.2 0TEMED 8ul
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