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越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference pathway)。RNAi的应用包括功能基因组学,药物靶筛选,细胞信号传导通路分析等等。 目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括· 化学合成 · 体外转录 · 长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III) · siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs · PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 前面3种方法包括体外制备siRNAs然后经过转染或者电转导入哺乳动物细胞后面两种方法则依赖能够表达siRNAs的DNA载体或者表达框转染到细胞中。每种方法都有自己的优点和缺点。哪种是最好的方法,其实取决于实验目的。这里简单介绍这5种方法,优点和缺点,以及它们最适合的应用。siRNA的设计 &nb < 1 > < 2 >
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