Pfu高保真酶常见问题

1. 克隆型和天然型 Pfu DNA聚合酶有什么不同？天然型Pfu 直接从热稳定性细菌Pyrococcus furiosus 纯化而来；克隆型Pfu 是从大肠杆菌中纯化得到的重组型产品。天然型和克隆型的Pfu 的PCR扩增基本特性和保真性基本一致，但是我们发现克隆型Pfu 的弥散背景与天然型相比更低。另外，Stratagene独有的专利Archaemaxx因子（与天然型Pfu共纯化得到）可以略微改善Pfu的操作性。2. Pfu有什么扩增特点，最优化的延伸温度是多少？天然型和克隆型Pfu DNA聚合酶的延伸速度均为72℃，2 min/kb。PfuTurbo DNA聚合酶扩增小片段时，延伸速度为1 min/kb，长片段（如6-10 kb的基因组模板或10-15 kb的质粒DNA模板）则要求2 min/kb。3. 常见的一些PCR添加剂能和Pfu DNA聚合酶一起使用吗？说明书中提到DMSO，甘油，甲酰胺，硫酸铵，Perfect Match和BSA都是可以使用的添加剂。但是保真性是否受影响却不一定。使用这些添加剂主要是提高酶的活性。　 • DMSO：改善GC含量高的DNA的变性情况，使聚合酶更容易在二级结构区延伸，但是当浓度大于10%时会降低保真性。　 • 甘油：提高产量，增加酶的稳定性。　 • 甲酰胺：促进某些引物－模板退火，降低带有二级结构的
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