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    体内体外表达齐头并进---Promega篇

    作为分子生物学领域老牌厂家,Promega同样有很有特色的原核表达系统,不过纵观Promega近年的表现,似乎不满足于此,而是将目光投向了跨物种间的穿梭表达,以及越来越热的体外表达系统了。     蛋白纯化,永远是蛋白表达后最令人关注的问题。Promega的 PinPoint™ Xa 表达系统则是巧妙利用了生物素作为亲和纯化的中介——将目的基因克隆到表达载体上的一段“神秘”多肽的DNA序列后面,这段‘神秘’多肽表达后在细胞体内会自然被生物素修饰,所以大肠杆菌表达出的融合蛋白就是已经被生物素标记了的融合蛋白——生物素化的融合蛋白可以在直接上亲和素纯化柱,进行高度专一的亲和纯化,最后用生物素就可以在非变性条件下洗脱产物——最后还需要Xa因子蛋白酶切将目标蛋白释放出来。这个系统利用“神秘”多肽自动在体内“生物素化”,不单方便产物检测、亲和纯化,而且得到的产物很多是可溶的,加上后继的亲和纯化条件温和,有助于得到活性的蛋白质。链霉亲和素碱性磷酸酶可直接通过“简化Western”的方法检测带生物素标签的融合蛋白质。  &nbs
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