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双向电泳的第一向IEF 电泳采用IPGphor,实验将变得很简单。IPGphor 包括半导体温控系统(18°C-25°C)和程序化电源(8000V,1.5mA)。可采用普通型胶条槽一步 完成胶条的水化、上样和电泳,大大减少操作步骤。IPGphor 一次可进行12 个胶条槽的电泳(7, 11, 13 ,18 ,24cm),因采用高电压(8000V),可缩短聚焦时间。最新推出 的通用型杯上样胶条槽因采用可移动的上样杯和电极,适合任何长度的IPG 胶条,尤其适合极性等电点蛋白的分离。IPG 胶条的水化和电泳仪器:IPGphor试剂:水化液(8M 尿素,2%CHAPS,15mM DTT 和0 .5%IPG 缓冲液):水化液需当天新鲜配制(可配成储液分装-20 度保存,但不可反复冻融)。尿素溶液加热温度不能超过37°C, 否则蛋白会发生氨甲酰化。 实验步骤:一. 加样品水化1. 用样品溶解缓冲液(9M 尿素, 4%CHAPS , 2%IPG 缓冲液,40mM DTT,40mM Tris-base)溶解样品 。蛋白质上样浓度不要超过10mg/ml,否则会造成蛋白质的集聚或沉淀。2.吸取适量(见下表)含有样品的水化液放入标准型胶条槽中,为确保样品充分进入胶条中,不要加入过量的水化液。IPG 胶条所需水化液体积 < 1 > < 2 >
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