钙调蛋白组分的活性测定

开始蛋白质纯化工作许多科学家还没花多少时间在蛋白质纯化的最初步骤方面仔细考虑，便急急忙忙地在可用来把所需蛋白质与杂蛋白分开的各种层析方法上绞尽脑汁。其实，蛋白质纯化工作一旦开始，首先必须确定有关待研究蛋白质的几个参数。常常假定生物活性是蛋白质的必然结果，这虽是一种假设，但确实存在大量的、在许多环境条件下具有活性的小分子和大分子。判断是否有蛋白质参与的最好准则是:①对内切蛋白酶的敏感性;②透析时的保留性;③变性剂引起的失活;④化学修饰剂引起的失活。所有这些准则都有例外。虽然大多数蛋白质对蛋白酶如胰蛋白酶等都是敏感的，但也有一些蛋白质保留有抗蛋白酶的核心，它可一直保持住活性，甚至比完整蛋白的活性还高。与小分子不同，蛋白质在透析时应能保留住，当然，这有赖于透析膜的标称截留分子量的额定范围。标称截留分子量范围为1000~30000Da的透析膜已有市售，但分子量接近截留值的蛋白质会因其形状而不能保留。此外，还有一些生物活性可能存在于分子量小于1000Da的肽中，因此，从技术上讲它们是有可能(但现在还不能)透析的蛋白类物质。常用的变性方法是加热或加离液剂(chaotropic agent)如尿素或胍盐离子等。许多蛋白质对加热引起的不可逆失活是敏感的，但也有一些明显的例外，如钙调蛋白，它是热稳定的。而且，离液剂引
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