细胞破碎和蛋白质溶解

细胞破碎和蛋白质溶解经典的细胞蛋白质分离纯化流程由下述主要步骤组成:清洗组织或细胞；裂解细胞；离心除去膜组分等获得可溶性蛋白质(目的蛋白是膜蛋白时用去垢剂处理)；通过离心、层析、电泳等方法进一步纯化，得到产物蛋白。细胞破碎前，组织一般用缓冲盐液洗去残留血液和污染物;培养细胞通常用缓冲盐液混悬后离心，除去残留培养液等。细胞破碎获得的抽提物称为匀浆。匀浆根据不同需要可以在12000*g离心10min到100000*g离心1h范围内离心。沉淀主要含有膜组分等，弃去。上清含有目的蛋白称为粗提物。如果粗提物有漂浮颗粒，可用纱布或玻璃纤维滤去后再进一步纯化。各种组织和细胞的常用裂解方法列于下表：细胞破碎方法组织种类旋刀式匀浆大多数动、植物组织手动式匀浆柔软的动物组织超声细胞混悬液高压匀浆细
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