蛋白质的环境因素

性功能(如酶活性，配体结合等)在这一时期内不降低。②在双相电泳中未见蛋白质降解。③在20000*g离心1 0min未见明显的沉淀(沉淀的出现意味着蛋白质的变性)。长期储存时(超过一周)，要根据不同蛋白质的稳定性来选择合适的方法。在确定某种方法大量保存某种蛋白质之前，应当实验以下几种不同的方法。1)一种最简单的方法是在硫酸铵溶液中将沉淀以悬浮形式保存于4℃。2)另一种方法，硫酸铵沉淀蛋白质后20000*g离心20min，在液氮中冷冻然后储存于-8O℃或更低的温度下。3)如果想冻存蛋白质，必须按照以下的操作以最大限度的减少蛋白质溶液中各相的分离以避免沉淀的发生或局部缓冲液浓度的增高而引起pH值在±3个单位中的波动。高浓度的蛋白(2mg/ml)可提供自我缓冲作用，在液氮中冷冻蛋白可减少冻结所需的时间。在液氮中冷冻蛋白质的合适的方法是用巴斯德滴管或自动加样枪将50ul的蛋白质液体小滴滴入液氮中。滴入的速度要慢，以防止蛋白质溶液未形成小滴。对大体积的蛋白质溶液的冷冻，可使用peristalic泵或自动滴液器来操作。在完成后，从液氮中将这些沉淀舀出迅速放入储存管中以防液滴的溶解，然后将其储存于-80℃或液氮中。在实验中可方便的倒出所需用量的蛋白质液滴从而避免多次反复冻溶所引起的蛋白质损害。4)最后的办法是将蛋白质以冻干的粉末保存。对许多蛋白质而言，冻干是长期储存最安全和最有效的办法，但是对极少数蛋白质来说一个明显的缺点是失活和不能再溶解。因此，在将所有的蛋白质以此方法储存之前必须取少量的进行试验。5)通常，甘油可有效的提高蛋白的稳定性。先配置成50%的甘油储存液，工作液中含20%~30%的甘油不会引起操作困难。在蛋白溶液中加人甘油可使溶液在低温非冷冻状态下保存。
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