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①称量：按照培养基配方，准确称取各成分放于烧杯中。（对于马铃薯培养基，先将马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤，再加糖，熔化后补充水至所需体积。）②熔化：向上述烧杯中加入所需要的水量，搅匀，然后加热使其溶解，如是配制固体培养基，在琼脂熔化过程中需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，则需先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌然后加足水分及其他药品，待完全熔化后，补足所失水分。③调节PH值：将配制好的培养基用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCl将其PH值调至所需的PH值范围。④分装：将培养基装入试管内或锥形瓶内，管口塞上棉花。分装高度对于试管来说，液体培养基分装高度以试管高度的1/4为宜，半固体培养基1/3为宜，固体培养基1/5为宜；分装高度对于锥形瓶来说，一般不超过容积的1/2为宜。注意：不要使培养基沾染在管口，以免浸湿棉塞，引起污染。⑤灭菌：高压蒸汽灭菌，它是利用高压蒸汽来达到灭菌的目的。其温度在100℃以上有强大的灭菌的能力。用高压蒸汽锅进行灭菌。将各种培养基分装好后，塞上棉塞，外面包上一层牛皮纸，按使用说明书进行操作，进行高温蒸汽灭菌。注：牛肉膏—蛋白胨培养基121℃灭菌20min。改良高氏一号培养基和马铃薯培养基115℃灭菌30min。
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