植物自交不亲和性测定技术

自交测定法1．每人选3～5株发育健壮已开花的种株，每株上选3～4个花序。将其上已开的花和角果摘除，然后套上隔离纸袋，把袋口用细铁丝扎紧防止昆虫进入，于植株旁插一细竹竿，用绳把纸袋绑到细竹竿上保持固定，防止花序被风吹断，并在竹竿上挂一纸牌作标记。2．2～3d以后，当每个花序上有10朵左右花开放时，解除纸袋，将已开的花和蕾之间绑一条线作为区分标记，同时在每个花序上选择10个左右大蕾，把其余的小蕾用镊子去掉，并用镊子把花蕾顶端的花被去掉一部分使柱头露出，切勿伤害柱头。再用镊子摘取本株隔离袋内已开花的花药，把花粉同时抹到已开的花和破蕾的柱头上，进行人工花期和蕾期自交。授粉完毕，于每个花序下面挂上纸牌，注明花期自交花数，蕾期自交蕾数，授粉者姓名和授粉日期。最后用纸袋按原来的套袋隔离方法进行套袋隔离。3．授粉2～3d后要及时提袋，防止花序于袋内顶弯或折断。在暴风雨后，要及时检查，如发现被风吹雨打破裂的隔离袋要及时修补或更换，被风吹倒了的植株要轻轻扶起来加以重新固定，切防折断。4．在授粉后7～10d花瓣脱落之后，可将隔离袋摘除，去掉多余花枝及后来陆续抽出的花枝，确保花序的发育。以后除按一般种株管理之外，应特别注意防止蚜虫、霜霉病等病虫害。5．当角果变黄后，可把角果带花枝剪下装入纸袋，拿到室内风干考种（表1－5）。（二）荧光鉴定法1．预先配制几种试剂（1）FAA固定液：将40%甲醛、80％酒精和冰醋酸，按1:8:1的比例配制而成。（2）卡诺固定液：用3份无水酒精和一份冰醋酸配制而成。（3）0.1N磷酸钾水溶液：称取71g磷酸钾，用蒸馏水定容至1000ml。（4）0.1%苯胺蓝溶液：称取0.1g水溶性苯胺蓝，用0.1N磷酸钾水溶液定容至100ml。（5）8N氢氧化钠溶液：称取32g氢氧化钠，用蒸馏水定容至100ml。2．取样、固定和保存解开人工控制自交授粉6～12h的花枝上的纸袋，摘取子房，于花柱基部切下花柱，将花期授粉和蕾期授粉的花柱分别固定于FAA固定液或卡诺固定液中，24h后，转移到70%酒精溶液中保存。在瓶上注明株号、花期授粉还是蕾期授粉处理以及试验者姓名。3．透明和软化将上述固定材料用水冲洗后，转移到指形管中，用8N氢氧化钠浸泡8～24h。4．染色把软化后的试材用自来水多次换水浸泡1h以上，除去大部分氢氧化钠之后，转移到0.1%苯胺蓝染液中染色4h左右。5．观察用镊子挑取一枚染色后的花柱，放在载玻片上，用滤纸吸出染液，滴上一滴甘油，盖上盖玻片，轻轻敲压盖玻片，使花柱展开。然后把载玻片放到荧光显微镜下，观察记载每株柱头胼胝质沉积状况，花粉萌发及花粉管生长状态。三、作业思考题1．按照上表中的数据资料，统计每株的亲和指数，即亲和指数＝每株结籽粒数/每株花期自交花数，并将资料进行合理分析。2．根据花期自交和蕾期自交柱头胼胝质沉积情况以及花粉管生长状况，判断取样株自交亲和与否，绘出亲和株和不亲和株花粉发芽以及生长状态图。3．本实验采用的第一种方法中，有哪些技术环节使可以变化的？4．花期人工控制自交测定自交不亲和性产生误差的原因有哪些？
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