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实验目的 1. 学习PCR反应的基本原理与实验技术。 2. 了解引物设计的一般要求。 实验原理 单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用DNA聚合酶复制出产物DNA。PCR反应应用以上的基本过程,分别在待复制的已知序列DNA分子两端各设计一条引物,其中在DNA 5’端的引物(Pl)对应于上链DNA单链的序列,3’端的引物(P2)对应于下链DNA单链的序列,Pl和P2按5’→3’方向相向配置。在含有引物、DNA合成底物dNTPs(dATP、dCTP、dGTP、dTTP 四种脱氧核糖核苷酸等摩尔数混合物)的缓冲液中,通过高温变性,使双链DNA变成单链DNA模板,降低温度复性,使引物与模板DNA配对,利用DNA聚合酶便可合成产物DNA。引物和dNT < 1 > < 2 >
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