A. 直接标记抗体(FITC标记抗体):(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。 加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法:(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的P < 1 > < 2 >
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