原位杂交

步骤1、玻片的处理；2、细胞培养；3、培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为，4%多聚甲醛/0.1M PBS（PH7.2-7.4），含有1/1000DEPC，室温固定20-30分钟。蒸馏水或0.1M PBS（DEPC）5’*2充分洗涤，干燥后-20℃冰冻，可保存2周以上。4、 Triton-100（3%） 6’，0.1M TBS 5’*3次；5、暴露mRNA核酸片断：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5-120秒钟（90秒）。有时也可以不消化。0.5M TBS洗5’*3次，蒸馏水洗1次。6、预杂交：湿盒的准备---干的杂交盒底部加20%甘油20ml，以保持湿度，按每张切片20ul加预杂交液，恒温箱37-40℃，2-4h，吸取多余液体，不洗。7、杂交：用杂交液稀释地高辛标记的寡核苷酸探针，浓度一般0.5-2ug/ml。按每张切片加20ul杂交液，将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上，恒温箱37-41.8℃，杂交过夜（36h）。8、杂交后洗涤揭掉盖玻片，3
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