原位杂交

30-37℃左右水温的2×SSC洗5’*2次，0.5×SSC洗涤15分钟×1次；0.2×SSC洗涤15分钟×1次。必要时可重复0.2×SSC洗涤1次。9、滴加封闭液：37℃ 30分钟，甩去多余液体，不洗；10、滴加生物素化鼠抗地高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟，0.5M TBS洗5’*4次。勿用其他缓冲液和蒸馏水洗涤11、滴加SABC-AP：37℃ 30分钟，0.5M TBS洗5’*4次。勿用其他缓冲液和蒸馏水洗涤12、BCIP/NBT显色：BCIP/NBT（×20）按1：20的比例用0.01M TBS（PH9.5）稀释，混匀。显色液加至标本上，一般30-37℃显色20-30分钟，若无背景出现则可继续显色，充分水洗。13、必要时核固红复染30-60秒，水洗。14、水溶性封片剂封片，摄像。准备工作A：缓冲液的配制：3%柠檬酸：100ml蒸馏水中加柠檬酸（C6H8O7.H2O） 3g，PH2.0左右2×SSC---1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠（C6H5O7Na3.2H2O，分子量294）8.8g0.5×SSC---300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可（1：3）0.2×SSC---270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可（1：9）20%甘油---20ml甘油加80ml蒸馏水即可0.5M TBS---1000ml蒸馏水加氯化钠30g，TRIS 1.2g 纯乙酸0.4-0.5ml,PH7.2-7.60.01M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml蒸馏水中加NaCL9g, Tris 1.2gB：操作程序：注意：最重要是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。C：免疫组化缓冲液的配制：1 0.2M PB①0.2M NaH2PO4：NaH2PO4.2H2O 31.2g（或NaH2PO4.H2O 27.6g）加重蒸水1000ml②0.2M Na2HPO4：Na2HPO4.12H2O71.632g（或NaH2PO4.7H2O 53.6g或NaH2PO4.2H2O 35.6g）加重蒸水1000ml③0.2M PB：19ml①+81ml②混合即可，pH值约为7.4-7.52 0.01M PBSNaCl8.5-9g, 0.2M PB 50ml,加重蒸水1000ml混匀即可3 0.5M TBS①0.5M Tris-HCl缓冲液:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl 约420ml重蒸水至1000ml先用少量重蒸水300-500ml溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷)，加入HCl后，用1N NaOH 或HCl将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml，此液为储备液，于4℃冰箱中保存，免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05M，用时取储备液稀释10倍即可。主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液等 4 Tris缓冲生理盐水（TBS）0.5M Tris-HCl缓冲液 100mlNaCl 3.5-9g(0.15M)重蒸水至1000ml先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水1000ml，最终浓度为0.05M。
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