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两分钟学习凝胶分析软件BandScan(Step by step ) |
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和JPG格式的图片,很方便。打开工具栏上的file/open tiff,jpg file format,选中待分析的图片。 5.打开。这时候凝胶图像显示出来。1道是低分子量标准,2道是诱导表达的蛋白,3道是未诱导的对照。旁边有一个图像预览窗口Image Preview,可以看到,除了cancal,其它命令框都是灰色的(不可操作)。其实这里是要你先选定一个图像处理的范围(select rectangle)。 6.从凝胶图左上角按住鼠标左键划到右下角,松开鼠标,划出的长方形框包扩了整个待分析的范围。这时,命令框内均变成黑色的(可以操作)。上面那个undo rect可以取消选框,下面的image options可以选择是否和如何旋转图像。本例中均不改动,直接单击accept selected region。 7.出现color to signal selections复选框。这个是选择信号检测方式,直接用默认的original image,或选择gray scale(灰阶)。本例中不改动,单击use current image。 8.出现如下分析框。它是自动转换成灰阶的。其左上角的数字是鼠标所在的坐标和灰度值。移动鼠标就可以看到它的变化。 9.现在让BandScan来分析一下电泳条带吧:)打开工具栏上的band finding/find bands,出现一个让你选择有几条泳道的框selecting number of lanes,我们设置成3道。 10.看,每一个条带都自动被框起来了:)红色+记号是条带的中心位置,兰色竖线是泳道位置。同时出现了一个复选框select more or select few bands。可以根据总灰度、最大灰度和大小为标准来自动选择蛋白条带。拉动左边的滚动条,可以增加或减少条带的数量。选好后单击ok。 11.现在就可以看看蛋白的表达量了。打开window/band table。出现了一个band location的表格。把它最大化,放到右边。这里的数据是每个条带的中心位置(红色+的位置)。 12.在band location的数据类型data type中,选择percent signal,就会出现各个条带灰度值占本泳道条带总灰度值的百分比。13.单击自己的表达条带,则条带中心的+和相应的百分数的背景都会变成绿色。我表达的融合蛋白约占细菌总蛋白的29.8%。我们要的数据就得到了。自己再重复一下整个过程,会发现,原来是如此简单:) 总结:真的只是领进门。因为BandScan绝不仅仅是这么简单,它还可以做很多事情。比如通过设定一个条带的量(标准)来推断表达蛋白的量。比如用手动方式加入未被自动选择的条带,等等。举个例,我们发现我的目的条带上面有几个浅条带没有被选上,可以用band finding/manually insert a band命令把它们选上。这时,条带百分数也会随之改变。这样直观的学习想必是大家都喜欢的吧:一个例子学会一个软件。我更加希望,有更多的高手可以用这种方式把初学者迅速领进门。有什么问题,请大家跟帖子或联系我,也希望大家支持我,把这件事情坚持做下去。 < 1 > < 2 >
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