一步实现单拷贝到高拷贝的转换---CopyControl克隆技术

p; EPI300 E.coli. 这是一个工程菌株，含有受诱导启动子严谨控制的trf A基因，在诱导表达的条件下可以提供启动oriV所需要的trf A基因产物。另外phage T1-resistant TransforMax EPI300-T1R E.Coli也可提供这个基因的产物。图1 CopyControl克隆和克隆诱导步骤（图2）：将目标DN-断连接到已经线性化、去磷酸化的CopyControl pCC1 Vector上。转化感受态细胞（TransforMax EPI300 E.coli），涂皿，在氯霉素LB培养基上筛选。在这种条件下，trfA基因的表达被抑制，克隆以单拷贝数量生长。挑选克隆，单个培养。加CopyControl诱导溶液到管中。诱导溶液诱导TransforMax EPI300 宿主细胞内trfA基因的表达，从而启动oriV，克隆由单拷贝转化为高拷贝。用常规方法从诱导细胞内分离DNA。这个系统用于常规PCR克隆或者文库构建时，经过诱导，每个细胞中的质粒拷贝数可以从1个提高到200个，非常厉害，对于下游的表达或者核酸纯化、测序等都很有帮助。而对于BAC和Fosmid等低拷贝的大型质粒来说，单拷贝的克隆的稳定性是非常重要的考虑因素，经过诱导后每个细胞中质粒的拷贝数可以达到10—50个，对于后继的实验更有重要的意义。
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