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一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4.0。4．异丙醇5．无水乙醇、70%乙醇6．酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）7．DEPC H2O：100ml ddH2O中，加入DEPC 0.1ml，弃分振荡，37℃孵育过夜。15磅高压灭茵，4℃保存备用。（二）操作步骤1．样品处理：（１）培养细胞：收集细胞1-2×107，离心，500g×5min。对于贴壁培养细胞，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化后，PBS重悬细胞并转移至10ml离心管中；悬浮培养细胞可直接转移离心管；离心：500g×5min；PBS洗涤2次。弃上清，置冰浴。加预冷变性液2 ml，充分摇动，使细胞裂解完全。以下操作均在冰浴中进行。（２）组织：取1-2g组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置组织匀浆器中，加入预冷的变性液12ml，在冰浴中充分匀浆。2．加2 M乙酸钠(pH 4.0)0.2ml，混合后将溶液转移至5ml离心管中。3．加酚：氯仿：异戊醇2.2ml，颠倒
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