细胞计数及活力测定

色2一3分钟。3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。（三）MTT法测细胞相对数和相对活力活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。l、细胞悬液以1000rpm离心10分钟，弃上清液。2、沉淀加入0.5－1ml MTT，吹打成悬液。3、37℃下保温2小时。4、加入4—5 ml酸化异丙醇（定容）。打匀。5、1000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色，酸化异丙醇调零点。注意：MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。附：1、0.4%台盼兰染液配制：台盼兰 0.4克加双蒸水至100 ml。2、MTT配制：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。3、酸化异丙醇配制：异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。
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