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    细胞原代培养

    一、原理将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。二、仪器、材料及试剂仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)材料:胎鼠或新生鼠试剂:1640培养基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank’s液,碘酒三、操作步骤(一)胰酶消化法1、器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2—3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中。2、用Hank’s液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。3、用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2),再用Hank’s液洗三次,转移至小青霉素瓶中。4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶抑制剂)。6、静置5—10分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。7、1000rpm,离心10分钟,弃
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