|
|
|
|
|
|
|
|
图1. 在显微镜下分离单个细胞 一步法RT-PCR 使用INVITROGEN的SUPERSCRIPT™ One-Step RT-PCR with PLATINUM® Taq System进行RT-PCR。 图2. 源自COS-7细胞的一步法RT-PCR产物。 1-3泳道分别是从1个，2个和5个细胞中扩增的人类肌动蛋白，使用的是有意义引物（CCT CGC CTT TGC CGA TCC）和反义引物（GGA TCT TCA TGA GGT AGT CAG TC）。C泳道则是没有加入反转录酶的扩增结果。 RT-PCR操作程序 向细胞中加入以下成分: 成分 量 2×反应混合物（含0.4mMdNTP, 2.4mM MgSO4的缓冲液） 25μl 有意义引物（10μΜ） 1μl 反义引物 （10μΜ） 1μl SUPERSCRIPT II RT/PLATINUM Taq DNA Polymerase Mix 1μl 蒸馏水 21μl 注：对于不加入反转录酶的对照反应，用2个单位的PLATINUM Taq DNA Polymerase代替酶混合物。将反应体系略加震荡以混合均匀，在50℃保温30分钟，然后在90℃保温2分钟。94℃15秒，60℃30秒，68℃1分钟，扩增40个循环。在含0.5μg/ml溴乙啶的1.2%琼脂糖凝胶上分析10μl PCR产物。
< 1 > < 2 >
|
|
|
|
|
设为首页 | 加入收藏 | 广告服务 | 友情链接 | 版权申明
Copyriht 2007 - 2008 © 科普之友 All right reserved |
