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PCR/RT-PCR指南---测定PLATINUMTM pfx DNA聚合酶的保真度 |
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摘要: PLATINUM™ pfx DNA聚合酶是一种高保真DNA聚合酶,特别适用于克隆和突变。PLATINUM™ pfx DNA聚合酶的保真性有两种分析来确定,rpsL保真度分析和LacZ保真度分析,并与其它聚合酶相比较。 当测定DNA聚合酶的保真度时,保真度数据的变化可能来自不同的分析过程,由于目标中的潜在的突变热点。当评价保真度数据时,保持相似的不是绝对数值而是相对比的酶之间的相对关系。这篇文章用两种分析来评价几种酶的保真度。PLATINUM™ pfx DNA聚合酶具有3’到5’的校正外切酶活性。与其它Taq DNA聚合酶相比具有最低的错误率。 方法: rpsL保真度分析:pMOL21质粒DNA(4kb),包含氨苄青霉素抗性(Apr)和rpsL基因,用ScaI线性化(图1)。按照制造商的使用说明。进行50微升体积的标准PCR反应,使用2单位Taq DNA聚合酶或PLATINUM™ Taq DNA聚合酶,2.5单位pfu DNA聚合酶或pf < 1 > < 2 >
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