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    PCR/RT-PCR指南---RT-PCR应用(4)

      5 和3 RACE RACE(cDNA末端快速扩增,Rapid Ampliphication of cDNA Ends)是一种获得转录本5或3未知序列的方法。不象普通RT-PCR那样使用两个序列特异性的引物,RACE使用一个序列特异性的引物和或者mRNA的poly(A)尾(3 RACE)或者加到cDNA末端的多聚同聚体(5 RACE)(图11)。RACE已经被用于扩增和克隆稀有mRNA。RACE的产物可以用来克隆,直接测序,制备探针或连接在一起得到全长cDNA。其中一个连接5 和3 RACE产物的方法是使用由5 及3 RACE得到的序列信息设计新的引物,以扩增全长的cDNA。使用RNaseH-的逆转录酶和高保真的热稳定聚合酶可以对较长的序列进行高保真的扩增,从而得到全长cDNA克隆。 5 RACE步骤概要
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