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    在难于转染的哺乳动物细胞中强大稳定的基因表达
    ViraPower™ Packaging Mix（经优化的包含三种包装质粒的混合物）和包含目的基因的pLenti6/V5表达载体共转染到293FT™ producer细胞中。转染后，收集上清，其中包含了已包装入病毒颗粒的目的基因。在收获和滴度鉴定后，将病毒上清加入任何培养的哺乳动物细胞或原代细胞系中，就可以进行基因表达了。或者，您也可以将病毒上清保存长达一年。为安全起见，病毒仅可以产生一次转导细胞，不会产生感染的继代细胞。   存至一年 转染哺乳动物细胞，筛选稳定表达并分析。 构建包含目的基因的pLenti6/V5™表达载体。   使用构建的pLenti6/V5™表达载体和优化的ViraPower™包装混合液共转染293FT™ producer细胞系。   收集病毒上清和鉴定滴度。     高速灵活的克隆 根据您的方便，现在有两种pLenti6/V5™表达载体可供选择，如果您想通过重组在不同的表达载体或系统间进行转换，可以选择使用了GateWay™技术的pLenti6/V5-DEST™载体；对于PCR产物克隆，可以选择pLenti6/V5-TOPO®载体，在5分钟内将目的基因TOPO®克隆到载体中。载体可以单独购买或做为ViraPower™ Lentiviral GateWay™或Directional TOPO® Expression试剂盒的一个组分获得。除了几个重要的安全特性，两种载体都含有： * CMV启动子，可以高水平表达。 * C-端V5标签，可以方便地检测重组蛋白。 * 杀稻瘟素抗性基因，可以进行快速有效的稳定筛选。 * 包装信号，可以将来自目的基因的RNA高效地包装到病毒颗粒中。 增加表达的选择性 传统的基于MLV的逆转录病毒系统需要一轮宿主细胞的分裂以进入细胞核，并整合到宿主基因组上。使用ViraPower™慢病毒系统，目的基因可以有效地输入到细胞核，高效整合并稳定表达（图2）。第一次，您可以把目的基因转染并稳定整合到非分裂细胞中（图3）。这样，您的潜在转染对象就扩展到生长或药物阻滞的细胞，非分裂的原代细胞及神经元细胞。 图2 使用pLenti6/V5™载体的高效长期表达   图3 慢病毒转染人原代成纤维细胞   转染后10天   传统逆转录病毒载体   转染后6周   pLenti6/V5-GW/lacZ™慢病毒载体 使用pLenti6/V5-GW/lacZ™慢病毒表达载体转染HT10890细胞，使用10μg/ml杀稻瘟素进行稳定筛选。在转染后10天和6周将培养物染色，检测β-半乳糖苷酶的表达。   使用逆转录病毒和慢病毒载体，在MOI为1时转染经contact抑制休眠的非分裂人原代包皮成纤维细胞，转染48小时后染色，检测β-半乳糖苷酶活性 每个细胞中的表达 病毒转导的独特性在于，其可以通过选定每细胞中注入的病毒数目（MOI）而可重复地调整结果。1个MOI定义为加入到细胞中的病毒颗粒数，即理论上一个细胞中转入一个病毒颗粒。MOI值和基因导入及表达直接相关（图4）。通过改变MOI值，您可以有效地调整每个细胞中整合基因数，从而调节基因表达的水平。 图4 基因表达同感染复数（MOI）直接相关 使用pLenti6/V5-GW/lacZ™病毒，在感染复数（MOI）分别为0.05，0.1，0.5和1时重复转染HT1080细胞。48小时后收获细胞，检测β-半乳糖苷酶活性。 内置的安全特性 为了保护，ViraPower™慢病毒表达系统拥有多个关键的内置安全特性，包括： * 以反式（in trans）方式提供HIV的包装功能，避免非预期的重组。在ViraPower™ Packaging Mix中不含LTR，所以包装载体不会包装成病毒颗粒。 * 此系统中产生的病毒颗粒不能复制，只能用来装载目的基因，不会产生其他的病毒颗粒。 * 慢病毒载体经过修饰，已被自灭活；当转染和整合后不能在产生可包装的病毒基因组。 * ViraPower™慢病毒表达系统安全去除了野生型病毒，可以安全使用。 完全去除了野生型病毒，可以安全使用。 使用ViraPower™获取结果 对以前难以转染的细胞类型也可以得到强大的表达，得到您期待已久的结果。请立刻致电订购ViraPower™慢病毒表达试剂盒。 产 品 包 装 货 号 价格 $ ViraPower™ Lentiviral Directional TOPO® Expression Kit 1 Kit K4950-00 1460.00 ViraPower™ Lentiviral Gateway™ Expression Kit 1 Kit K4960-00 1460.00 pLenti6/V5™ Directional TOPO® Cloning Kit 1 Kit K4955-10 1194.00 pLenti6/V5-DEST™ Gateway™ Vector Pack 6µg V496-10 1194.00 ViraPower™ Lentiviral Support Kit 20 rxns K4970-00 747.00 293FT Cells 3 ×10^6 cells R700-00 287.00
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