125I标记单克隆抗体技术

同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。　　(一)　原理氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I２氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。　　(二)　方法　　　　　　在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg／100μl，　　　　　　再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液　　　　　　再加入10μl(含1mCi)125I　　　　　　　　　　↓　　　　　　加入10μl氯胺-T(5mg／ml溶于0.05M　　　　　　磷酸盐缓冲液)，孵育时间不超过30秒　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mg／ml溶于　　　　　　0.05M磷酸缓冲液)　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　加入200μl　KI溶液(少许结晶KI溶于0.05M　　　　　　磷酸缓冲液＋4％牛血清白蛋白)　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　用PD10柱(Sephade
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