哺乳动物细胞总RNA的分离

　这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化）去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋白酶K消化或被抑制剂灭活前有时间发挥作用。原方案中（Favaloro等。1980）采用的裂解缓冲液含有0.015 ％（W/V）的Macaloid（硅藻土），用于吸附并灭活RNA酶。尽管现仍有Macaloid出售NL Chemicals），但氧钒核糖核苷复合物和RNA酶的蛋白质抑制剂更常用。下述程序的优点是速度快，并能同时处理很多样品。一、细胞的裂解a．单层细胞的裂解a）吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。b）直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液，并使之遍布整个平板的表面。RNA提取缓冲注液0.14mol/L NaCl1.5mmol/L MgCl210mmol/L Tris.Cl(pH8.6)0.5％NP-401mmol/L二硫苏糖醇（DTT）100单位/ml胎盘RNA酶抑制剂
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