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    如何筛选重组菌落

    可使用蓝/白斑筛选法,在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上,重组菌株为白色,未转入重组质粒的菌株为蓝色。  可对小量提取的质粒DNA做限制性酶切,采用天为时代公司的质粒提取试剂盒,可快速提取多个样本,而且由于提取的质粒纯度高,不会有酶切切不开,影响实验的情况。  也可直接用细菌菌落进行PCR反应,筛选存在目的片段的重组菌落。天为时代公司生产的一管便捷式PCR反应系统(MasterMix系列产品)特别适合这种方法。用灭菌的吸头挑取单个菌落到已加入MasterMix的PCR管中,加入特异引物,进行PCR扩增。扩增反应前在94℃变性5分钟,有利于细菌的裂解,提高PCR产物扩增的成功。将所得PCR产物在琼脂糖凝胶上检测扩增带。 另一种筛选重组菌落的方法是用插入片段特异引物进行菌落杂交。菌落生长后转移到固体支持物如硝酸纤维膜上,作原位裂解,使质粒附着到膜上,然后用核酸引物作杂交。多用于筛选稀有克隆菌落。
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