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    蛋白质纯化经验指南(4)

    1) 还有个小问题,是不是G后面的数字越大,就刚性越差,越容易受外因素影响?是的,G后面的数字越大,就刚性越差,越不耐压和盐溶液。 2)表达的是带有GST的融合蛋白,醇化后需用凝血酶切割,我想问一下这个凝血酶与临床上用的凝血酶一样吗?是一样的,但是用于酶切的要求的纯度更高。 3)在做WB,因为是血清标本,含有较多的白蛋白,可能影响我的实验结果。我请问过ptglab楼主,他推荐我来这儿问一问。请问高手有什么方法吗?哪一种比较简单经济?蓝色琼脂糖凝胶可以分离吗?用蓝色琼脂糖凝胶就可以去除,我觉得很快也很特异,样品直接穿过柱子白蛋白就可以去掉90%以上,你pM你的邮件地址给我,我给你一份相关的材料,我们这里就有这个填料。 4)凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析上样时,对样品目的蛋白浓度的要求是不是一样的?样品浓度一般要求在多大范围内?凝胶过滤处理样品量主要是受体积的影响大,浓度相对要小一些,上样量在床体积5%左右,如果是除盐可以上到20%左右。其他的主要是上样的浓度,一般就在5-10mg/ml填料,具体的情况得看填料的载量和使用说明。 5)我问的意思是在纯化过程中,如果蛋白酶抑制剂去掉了,而该蛋白酶还未去掉,我担心此蛋白酶还会消化我的目的蛋白,请问我说得有没有道理?有没有必要考虑?你可以用抗体做WB检测你的纯化的蛋白,如果确实有
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