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    RNA操作注意事项与实验技巧

    水配制(加0.01%(体积比)DEPC至重蒸水或Mili Q级水中,处理过夜,灭菌即成DEPC水)。5.所有玻璃制品都必须在240℃烘烤4小时。所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟,并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌,也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次,这样通常可以消除RNA酶的活性。样本保存的注意事项:  样本一旦从生物体中分离后,细胞内的RNA就变得非常不稳定,容易降解。因此取样后,如何保证取样前后基因的表达模式不变,就变得非常重要。传统方法是用液氮速冻,再放到超低温冰箱中保存。  目前有些厂家开发出专门的RNA保护剂,如Qiagen公司的RNAlater是具有抑制RNase和稳定RNA作用的试剂,将采集的组织样本等直接放入到RNAlater中,即可起到稳定样本中RNA的作用。无需液氮或干冰,方便安全地在室温下保存一段时间,低温可长期保存。还有对细菌样本专用的RNAprotect Bacteria Reagent及对血液样本专用的PAXgene™ Blood RNA System。RNA的定量与纯度:  RNA通常用分光光度计定量,测量在260 nm处的吸收值(A260)。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的,因此RNA提取结束后,要根据大概产量稀释(推荐用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀释)到适当浓度范围,再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 µg/ml。  为了检测RNA的纯度,可以测量A260与A280的比值,通常纯RNA的A260/A280为1.9-2.1。
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