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一、目的要求 证明不同的微生物对复杂有机大分子的水解能力不同,从而说明不同的微生物有不同的酶系统。 二、基本原理 细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外,将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色;水解明胶可观察到明胶被液化;脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。 三、器材 金*葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,绿脓杆菌(Bacte-rium Pyocyaneum)斜面各一支; 油脂培养基,淀粉培养基,明胶培养基,无菌平皿,接种环和接种针,革兰氏染色用卢戈氏碘液(Lugols iodine solution)等。 四、操作步骤 1.油脂水解试验 (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时,充分振荡,使油脂均匀分布,用无菌操作倒入平皿中,待凝。 (2)将制成的平板用记号笔划成两半,一半接种金*葡萄球菌作为对照,另一半接种枯草芽孢杆菌作为试验菌,均用无菌操作画“+”接种,如图Ⅹ-1。 (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。 (4)取出平板,观察平板底层长菌的地方, < 1 > < 2 >
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