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中，吸吹三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图Ⅷ-3。 3．取样 用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 4．倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。 5．计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 平板菌蓓计数法的操作除上述的以外，还可用涂布平板的方法进行。二者操作基本相同，所不同的是涂布平板法是先将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，待凝固后编号，并于 37℃温室中烘烤30分钟左右，使其干燥，然后用无菌吸管吸取 0．2ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20—30分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温室中培养。 五、实验报告 1．结果 将计数结果填入下表。 2．思考题 (1)为什么溶化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板？ (2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？ (3)同一种菌液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数，所得结果是否一样？为什么？ (4)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点。
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