微生物实验---高压蒸汽灭菌

用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃灭菌15分钟，但为了保证效果，可将其他成分先行121．3℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的培养基以1．05kg/cm2，121．3℃灭菌20分钟即可，而盛于大瓶内的培养基最好以1．05kg/cm2灭菌30分钟。　　蒸汽压力所用单位为kg/cm2（千克/厘米2），它与lb/in2（磅/英寸2）和温度的换算关系见表Ⅵ-5。　　实验室中常用的高压蒸汽灭菌锅有立式、卧式和手提式等几种，其构造如图Ⅵ-4。本实验介绍手提式高压蒸汽灭菌锅的使用方法。三、器材　　牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包），手提式高压蒸汽菌锅等。四、操作步骤　　1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。　　2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。　　3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。　　4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。　　5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。　　6．将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。五、实验报告　　1．结果　　检查培养基灭菌是否彻底。　　2．思考题　　（1）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？（2）在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素？
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