微生物实验---细菌细胞壁的染色法和细胞质膜的观察

　　一、目的要求　　1．学习掌握细菌细胞壁的染色法。　　2．利用质壁分离法观察细菌的细胞壁和细胞质膜。　　二、基本原理　　细菌细胞壁很薄，革兰氏阳性菌的细胞壁为20—30nm，革兰氏阴性菌的细胞壁为10—13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞，细胞壁本身并未染色，因此，欲通过染色来观察细胞壁，必须设法使细胞壁能着色，而细胞质则不易着色，常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用，它们使细胞壁形成可着色的复合物，而使细胞质不易被着色，经结晶紫或甲基绿染色后，便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。　　根据细菌细胞在高渗溶液中或用*蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。　　三、器材　　巨大芽孢杆菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢杆菌；　　0．2％结晶紫水溶液，5％单宁酸（鞣酸）水溶液，1％磷钼酸水溶液，1％甲基绿水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％结晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，*，*蒸气瓶等。　　四、操作步骤　　1．单宁酸法　　(1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。　　(2
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