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注意不要挑上培养基，在载玻片的水滴中轻沾几下。将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥。 (3)染色 涂片干燥后滴加A液染3—5分钟，用蒸馏水冲洗，或将残水沥干或用B液冲去残水（注意：一定要充分洗净A液后再加B液，否则背景很脏）。洗净A液滴加B液后，将玻片在酒精灯上稍加热，使其微冒蒸汽且不干，一般染30—60秒钟。然后用蒸馏水冲洗，自然干燥。 (4)镜检 镜检时，如未见鞭毛，应在整个涂片上多找几个视野，有时只在部分涂片上染出鞭毛。菌体为深褐色，鞭毛为褐色。 细菌鞭毛染色要求非常小心细致，染色成功的关键主要决定于：(a)菌种活化的情况，即要连续移种几次；(b)菌龄要合适，一般在幼龄时鞭毛情况最好，易于染色；(c)新鲜的染色液；(d)载玻片要求干净无油污。鞭毛染色所用载玻片的清洗方法如下： 选择光滑无伤痕的玻片。先用洗衣粉煮沸，洗衣粉最好在洗玻片前加蒸馏水煮沸，用滤纸过滤去渣。为了避免玻片彼此磨损，最好把载玻片放在特制的架上煮，煮毕稍冷却后取出，用清水洗净，再放入浓洗液中浸泡24小时左右，取出用清水冲洗残酸，最后用蒸馏水洗净，沥干水并放于95％乙醇中脱水，取出玻片，用火焰烧去酒精，立即使用。如不立刻使用，可存放于干净的盒中或50％乙醇中短期存放。由于空气中常常漂浮油污，最好立即使用。在洗净的玻片上滴上水滴后应能均匀散开。 2．运动性观察 (1)压滴法 (a)分别将5ml无菌水倒入苏云金芽孢杆菌、假单胞菌和金-葡萄球菌的斜面培养物内，制成菌悬液。各取出1ml菌液稀释至肉眼看不到混浊为止。 (b)各取2—3环三种稀释菌液，分别放在三片清洁的载玻片中央，再各放一环万分之一的美蓝水溶液混匀。 (c)用镊子夹一洁净的盖玻片，使其一边先接触菌液，然后将整个盖玻片慢慢放下，注意不要产生气泡。按此法分别将盖玻片覆盖于三种菌液上。 (d)先以低倍镜找到标本，再用高倍镜观察，观察时光线要调得暗些。 (2)悬滴法 (a)在洁净盖玻片周围涂少许凡士林。 (b)在盖玻片中央滴一小滴菌液，或用接种环取1—2环菌液置于中央。 (c)将凹玻片反转，使凹窝中心对准盖玻片上的菌液滴，液滴不得与凹玻片接触，以接种环柄轻压使盖玻片与凹玻片粘在一起，液滴处于封闭的小室中，防止液滴干燥和气流的影响。 (d)小心将凹玻片翻转过来，使菌滴仍悬浮在盖玻片下和凹窝中心（图Ⅳ-3）。 (e)先用低倍镜找到悬滴边缘，再用高倍镜观察。观察时光线要调得暗一些。 用悬滴法分别观察苏云金芽孢杆菌、假单胞菌和金-葡萄球菌的运动性。细菌的运动有一定的前进方向，并可转弯，极生单鞭毛菌类多为直线运动，周生鞭毛菌类多作波浪式运动。 五、实验报告 1．结果 你观察到的三种菌是否都有鞭毛？绘图表示你所观察到的细菌鞭毛着生情况。 2．思考题 (1)你所观察到的三种菌是否都具运动性？为什么？ (2)没有鞭毛的活细菌在光学显微镜下完全不动吗？真实地记录你观察到的现象，并进行解释。
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