微生物实验---暗视野光学显微镜

　　一、目的要求　　1．了解暗视野显微镜的基本原理及用途。　　2．学习并掌握使用暗视野显微镜观察微生物样品的基本技术。　　二、基本原理　　生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的，不易看清。暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时，可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的，即给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品上反射或折射的光进入物镜，那么，在漆黑的视野中，由于反差增大了，使样品能够看得更清楚。因用暗视野法可以在黑暗的视野中看到光亮的菌体，故在观察生活细菌及细菌运动时常采用此法。　　暗视野显微镜的构造主要是采用一种特殊的聚光器，在聚光器的下方中央为圆形黑盘所遮，光仅由周缘进入，使光会聚于载玻片上，并斜照物体，物体经斜射照明后，发出反射光可进入物镜，这样，造成显微镜视野黑暗，而其中的物体明亮。如无暗视野显微镜时，只需将明视野显微镜上的聚光器取下，换上暗视野聚光器即可；也可在明视野显微镜聚光器下面的滤光镜支架上放一片星形挡板（star diaphragm）（图Ⅲ-6）构成暗视野，这种方法适用于低倍镜观察。　　在暗视野中，由于有些活细胞其外表比死细胞明亮，所以暗视野也被用来区分死、活细胞，此技术现已被用于各种酵母细胞的死、活鉴别。此外，暗视野显微镜对于观察娇弱的微生物，如梅毒密螺旋体（Treponema pallidum）特别有用。　　三、器材　　酿酒酵母（Sacchar
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