微生物实验---暗视野光学显微镜

romy-ces cerevisiae）；　　暗视野显微镜，载玻片，盖玻片，无菌水。　　四、操作步骤　　1．选厚薄在1．0—1．2mm的干净载玻片一块，滴上酿酒酵母悬液，加盖玻片（注意切勿有气泡存在）。　　2．将聚光镜光圈调至1．4。　　3．光源的光圈孔调至最大。　　4．在聚光器上放一大滴香柏油，将标本置载物台上，旋上聚光器使油与载玻片接触（不能有气泡发生）。　　5．用低倍物镜及7×目镜进行配光对准物体。调节聚光器的高度，首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈，最后为一光亮的光点（图Ⅲ-7），光点愈小愈好，由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。　　6．换上所需目镜和高倍镜，缓慢上升物镜进行调焦，至视野中心出现发光的样品。　　7．在盖玻片上滴一滴香柏油，并将油镜转至应在位置调节配光，进行观察。　　五、注意事项　　1．进行暗视野观察时，聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满，否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射，达不到被检物体，从而不能得到暗视野照明。　　2．在进行暗视野观察标本前，一定要进行聚光镜的中心调节和调焦，使焦点与被检物体一致。　　3．由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大（ NA=1．2—1．4），焦点较浅，因此，过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处，一般载玻片厚度为1．0mm左右，盖玻片厚度宜在0．16mm以下，同时载玻片、盖玻片应很清洁，无油脂及划痕，否则都会严重地扰乱最终的像。　　六、实验报告　　思考题　　（1）观察活细胞的个体形态，你认为用显微镜的明视野好？还是暗视野好？为什么？　　（2）你所观察到的酿酒酵母，在暗视野中能否区分死、活细胞？　　（3）暗视野观察时，所用的载玻片、盖玻片有何要求？为什么？
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