一、 材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。 二、设备 电泳仪及电泳槽, 照相用塑料盆5只,玻璃或塑料板(比胶块略大) 4块,吸水纸若干,尼龙膜(依胶大小而定),滤纸 ,eppendorf管(0.5ml)若干。 三、试剂: 1、限制性内切酶(BamHⅠ, EcoRⅠ, HindⅢ, XbaⅠ)及10×酶切缓冲液。 2、5×TBE电泳缓冲液:配方见第一章。 3、变性液:0.5mol/L NaOH,1.5mol/L NaCl 。 4、中和液:1mol/LTris·Cl, pH7.5/1.5mol/L NaCl 。 5、10×SSC:配方见第九章。 6、其它试剂:0.4mol/L NaOH,0.2mol/L Tris·Cl, pH7.5/2×SSC ,ddH2O,Agarose 0.8%, 0.25mol/L HCl 。 四. 操作步骤 1. 基因组DNA的酶解 (1) 大片断DNA的提取详见基因组DNA提取实验,要求提取的DNA分子量大于50kb, 没有降解。 (2) 在50μl反应体系中,进行酶切反应: 5μg基因组DNA 5μl 10×酶切缓冲液 20单位(U)限制酶(任意一种) 加ddH2 O, 至50μl (3) 轻微振荡, 离心,37℃反应过夜。 (4) 取 < 1 > < 2 >
|