取5μl反应液,0.8％琼脂糖电泳观察酶切是否彻底，这时不应有大于30kb的明显亮带出现。 [注意] 未酶切的DNA要防止发生降解, 酶切反应一定要彻底。 2. Southern转移 （1） 酶解的DNA经0.8％琼脂糖凝胶电泳(可18V过夜)后EB染色观察。 （2） 将凝胶块浸没于0.25mol/L HCl中脱嘌呤, 10分钟。 （3） 取出胶块, 蒸馏水漂洗, 转至变性液变性45分钟。经蒸馏水漂洗后转至中和液中和30分钟。 （4） 预先将尼龙膜,滤纸浸入水中,再浸入10×SSC中,将一玻璃板架于盆中铺一层滤纸(桥)然后将胶块反转放置,盖上尼龙膜,上覆二层滤纸,再加盖吸水纸,压上半公斤重物, 以10×SSC盐溶液吸印,维持18-24小时。也可用电转移或真空转移。 （5） 取下尼龙膜, 0.4mol/L NaOH 30秒, 迅速转至0.2mol/L Tris·Cl,pH7.5/2×SSC,溶液中, 5分钟。 （6） 将膜夹于2层滤纸内, 80℃真空干燥2小时。 （7） 探针的制备和杂交见第九章分子杂交部分。 [注意] 1、 步骤（2）中脱嘌呤时间不能过长。 2、 除步骤（1）、（4）、（5）外, 其余均在摇床上进行操作。 3、步骤（4）中,当尼龙膜覆于胶上时, 绝对防止胶与膜之间有气泡发生, 加盖滤时也不应有气泡发生。 4、有时用一种限制性内切酶不能发现RFLP的差异，这时应该试用另一种酶。
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