双链DNA探针切口平移法

l, 10μCi/μl。　　(4) E.coli DNA聚合酶Ⅰ(4单位/μ l):溶于50μ g/ml BSA, 1mmol/L DTT, 50%甘油，50mmol/L Tris·Cl(pH7.5)中。　　(5)DNA酶Ⅰ:1mg/ml。　　(6)EDTA :200mmol/L (pH8.0)。　　(7)10mol/L NH4Ac。　　操作步骤: 　　(1) 按下列配比混合: 　　　　未标记的dNTP 10μl 　　　　10×切口平移缓冲液 5μl 　　　　待标记的DNA 1μg 　　　　[α-32 P]dCTP或dATP(70μCi) 7μl 　　　　E.coli DNA聚合酶 4单位　　　　DAN酶 I 1μl 　　　　加水至终体积 50μl 　　(2) 置于15℃水浴60分钟。　　(3) 加入5μl EDTA终止反应。　　(4) 反应液中加入醋酸铵,使终浓度为0.5mol/L, 加入两倍体积预冷无水乙醇沉淀回收DNA探针。
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